狗狗杆菌有几种?
犬瘟热病毒(Canine Distemper Virus, CDV)是犬传染性病毒病中危害最大的一种急性接触性传染病,临床以双相热、眼鼻流浆液性或化脓性分泌物、腹泻、下呼吸道症状为特征。本病在自然条件下,主要通过呼吸道和消化道感染,发病率高,死亡率可高达80%以上[1] ;近年来该病的流行呈全球分布趋势,并且有增加的趋势 [2,3] ;国内也有报道表明CDV的感染率约为49.67% (4]。因此,对犬瘟热的防控成为宠物饲养者以及兽医工作者面临的重要课题之一 对犬瘟热的防控目前主要采用疫苗接种的方法,目前犬用疫苗主要包括灭活疫苗和弱毒疫苗两大类,其中灭活疫苗又分为细胞培养灭活疫苗和DNA疫苗等类型(5)。国外研究表明不同类型的犬瘟热疫苗能够产生不同的免疫应答效果[6-8],从而影响着疫苗的接种效果,但是关于不同类型犬瘟热疫苗产生的免疫保护机理研究仍然较少。
1材料与方法 1.1实验动物及分组 健康成年圣伯纳犬2只,年龄3岁,体重31kg±2.9 kg由江苏南京某宠物店提供。随机分成两组,试验组接种灭活疫苗(细胞培养疫苗),对照组接种弱毒疫苗(犬五联活疫苗),每组各一只,分别编号L和M,于基础免疫后3周取静脉血检测抗体效价。
1.2试剂与仪器 犬瘟热病毒抗原和阴性血清均购自杭州博谷生物技术有限公司。酶标二抗购自Sigma公司。细胞裂解液、Trizol RNA分离液和M-MLV反转录试剂盒均购自Invitrogen公司。PCR引物由上海生工生物技术有限公司合成。BX51显微摄影系统购自Olympus。超低温冰箱购自Thermo。
2结果 2.1临床症状 L组的圣伯纳犬出现食欲不振、精神沉郁症状,随后体温升高至40℃,食欲渐减少,并出现咳嗽、打喷嚏等症状。M组在注射完第一次疫苗后开始出现嗜睡症状,第二次免疫后开始有轻微腹泻,但体温未超过39.7℃,也未出现咳喘现象。
2.2抗体检测 试验组和对照组分别在第0、7、21天共免疫3次。在第3周末采血测抗体水平(表1)。结果显示,在初次免疫后,两者均有较高抗体滴度,但在二次免疫后的测定中,只有L组表现出较高的抗体水平。
2.3病原学检测 在第21天的采样时,取L组耳尖部静脉血进行检测,同时取L组血清进行血清中和实验,并对L组耳尖、股四头肌、心肌和脑组织进行病原学检测,M组耳尖部静脉血则用于核酸检测。从图4可见L组的脑、肺脏和心脏的组织病理变化较明显,而M组仅有轻微的脑组织水肿,其余未见明显的病理改变,与血清中和检测结果一致。